名词解释： 发酵工程：在最适发酵条件下，在发酵罐中很多培育细胞和出产代谢产品的工艺技能。 发酵单位：又称效价。是衡量发酵罐中意图产品的含量凹凸的方针，归于技能方针一把用u/ml,mg/l。一般情况下用于表明发酵水平的凹凸 生物转化：指外源化学物在机体内经多种酶催化的代谢转化 前体:指在产品组成进程中，被菌体直接用于产品组成而本身结构无显着改动的物质。最早是在青霉素出产中发现的 玉米浆（苯乙胺） 虾青素（甲羟戊酸） 消毒：在工业微生物中消毒指的是除掉杂菌，除掉会引起污染的微生物，在工业上是灭杀引起出产污染的微生物 灭菌：指的是杀死悉数微生物 包含繁衍体和芽孢），不分病原和非病原微生物，杂菌和非杂菌。指把物体上的一切微生物（包含细菌芽孢在内）悉数杀死的办法 透气比/VVM：单位时刻（min）单位体积（m3）培育基中通入标准情况下空气的体积 在线检测：运用传感器检测不脱离出产线的对参数实时监测 离线监测：检测样品脱离出产线，检测后生成不在一同的检测 溶解氧：指溶解在水中的分子氧，以每升水中所含氧的毫克数来表明 临界溶氧浓度：不影响微生物呼吸时的最低溶氧浓度 Monod方程：跟着细胞的很多繁衍，培育基中的养分物质敏捷耗费至约束浓度，培育基中有害代谢产品堆集增多，细胞的成长速率逐步下降，进入减速期，当培育液中不存在按捺细胞成长的物质时，细胞的比成长速率和约束性基质浓度S的联络 活化：保藏菌种到斜面种子 扩展培育：斜面种子--三角瓶液体培育--种子罐 干热灭菌：运用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物，适用于玻璃及金属用具、沙土管灭菌 140~180 1~2h 湿热灭菌法：凭借蒸汽开释的热能使微生物蛋白质酶核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到损坏，引起不可逆变形，使微生物逝世。在有水分存在情况下，pr更易受热凝结变性，是用培育基和发酵设备灭菌。121 30min 饱满蒸汽；100度 水煮 热灭菌法：运用空气压缩时放出的热量进行保温灭菌。从压缩机到空气贮罐一段管道保温进行保温是空气到达高温后坚持一段时刻，确保卫生网逝世 辐射灭菌：声能，高能阴极射线、X射线、Y射线和紫外线都能损坏蛋白质活性起到灭菌作用 静电除菌：悬浮于空气中的微生物，微生物孢子大多有不同的电荷，没有带电荷而微粒在进入高压静电场是都会被电桥变成带电微粒 过滤除菌：微粒随电流经过滤层是，滤层纤维所构成的网格阻挠气流直线行进，使气流出现五十次改动运动速度和运动方向，绕过纤维行进，这些改动引起微粒对滤层纤维发生惯性冲击、阻挠，重力沉降，布朗分散，静电招引壁作用而微粒停留子纤维外表，然后到达除菌意图。 影响氧传递的要素：微生物发酵中，通入发酵罐内的空气中含有的氧不断溶于培育液中，以供菌体细胞代谢之需。这种由气态氧转变为溶解态氧的进程与液体吸收气体的进程相同，所以可用描绘气体溶解于液体的双膜理论的传质公式表明：N kLa C*-CL N:O2的传递速率 C*：溶液中饱满溶解氧浓度 CL：溶液干流中的溶解氧浓度 kL:以浓度差为推动力的氧传质系数 a：比外表积 培育基灭菌机理：致死温度：杀死微生物的极限温度（最低或最高温度）2致死时刻：在致死温度下，杀死悉数微生物所需时刻。 反响速率常熟K：K与菌种的特性有关，相同温度下，微生物越耐热，K值越小；相同温度下，微生物越不耐热，K值越大 相同的温差，如相同升高10℃，活化能越高，则K增加越多，K对温度越活络。活化能为零，则为零级反响。K不随温度改动。 碳氮比：有机物中碳的总含量与氮的总含量的比 氮源过多，会使菌体成长过于旺盛，pH偏高，不利于代谢产品的堆集；氮源缺乏，则菌体繁衍量少，然后影响产值。 碳源过多，则简单构成较低的pH（封压变大，CO2在水中溶解度变大），不利于菌体的成长，若碳源缺乏则会引起菌体的变老和自溶。 速效碳源：能够被微生物直接运用的含碳化合物 迟效氮源：无机氮源或已蛋白质降解产品办法存在的有机氮源 速效氮源：能够直接被菌体吸收运用的氮源 内源调理：由发酵液中微生物排泄的代谢产品导致的发酵液pH的改动 外源调理：由外源增加的物质导致的发酵液pH的改动 怎么调理：用难溶碳酸盐调理pH 浸透压：在半透膜两边因为浓度差而导致的溶剂压力差。附上图 刚好能够阻挠水分子经过半透膜从浓度较低的溶液移向浓度较高的液体的，在较高浓度溶液的液面上施加的额定压强。 湿热灭菌：微生物细胞是由蛋白质组成，加热能够导致蛋白质变性，然后到达微生物灭菌的意图。微生物对高温的活络性大于对低温的活络性，所以选用高温灭菌是一种有用的灭菌办法。细胞内蛋白质的凝结性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内的含水量越大，蛋白质凝结越快。 长处：更低温度到达更好的作用。高温比低温易死，湿热比干热更易死。 易错PCR：指在扩增意图基因的一起参加碱基错配，导致意图基因随机骤变 交织延伸：在PCR反响中把惯例的退火和延伸合并为一步，缩短其反响时刻，然后只能组成出十分短的重生链 ，经变性的重生链再作为引物与系统内一起存在的不同模板退火而持续延伸。 填空： 发酵办法的类别： 按微生物成长特性： 分批发酵 接连发酵 按培育基物理性状： 液体 固体 按对氧气需求： 厌氧 有氧发酵 按用处： 斜面培育基 种子培育基 发酵培育基 细菌：养分肉汤和养分琼脂培育基 牛肉膏和蛋白胨 菌种保藏的含义：菌种会退化 菌种保藏的原理：休眠体 菌种保藏的办法：斜面低温保藏 液体白腊保藏 液氮冷冻保藏 暂时保种 低温缺氧 慢速冻住 每min 30℃ 霉菌 酵母菌 有芽孢的细菌易保存 Q发酵 Q生物+Q拌和—Q蒸腾—Q辐射 微生物细胞的破碎：机械破碎法：高压匀浆法 珠磨法 超声波碎法 非机械破碎法：溶酶法 化学浸透法 除菌办法：辐射灭菌 热灭菌 静电除菌 过滤除菌法（空气中用得最多） 下降发酵液中的CL：削减通气量或拌和转速 膜别离的四种办法： 透析、超滤、反浸透、电浸透 简答： 灭菌含义：如有杂菌 6.噬菌体——溶菌 5.杂菌降解所要产品 4.杂菌汤所发生的物质使提取产品时发生困难 3.杂菌污染终产品 2.杂菌成长速度快1.... 拌和桨的作用：1发生轴向和横向活动，促进传质和传热2打碎气泡，增加气液触摸面积，进步溶氧3消除泡沫4速度太快会导致剪切力增加，也会导致气泛 进步饱满溶解氧浓度C*的办法：①降温②溶液性质：溶质含量越高，氧溶解度越小③氧分压：在系统总压小于0.5MPa时，氧在aq中溶解度只与氧的分压成直线联络，气相中氧浓度越高，溶液中氧浓度也增加 温热灭菌 巴斯德灭菌：酒、啤酒、乳类、奶油和各种腌制食物的调制63℃ 30s 72℃15s 间歇灭菌：各种M的养分体在100℃下半小时即可被杀死，先杀亲本，等子代长大再杀而芽孢和孢子不会失去生机，当它们长成养分体再灭菌，接连灭菌3次 过滤除菌：用于压缩空气，酶溶液以及其他不耐热的微生物 0.01-0.45mm 辐射灭菌（超净工作台）：紫外线、X射线、Y射线（臭味） 化学物质灭菌：运用范围：器皿、双手，试验室、无菌室的环境灭菌，不能用于培育基灭菌高锰酸钾：强氧化剂，使Pro氧化 （浸化） 漂白粉：强氧化剂，使Pro氧化变性 75%酒精：细胞脱水，Pro凝结 新洁尔灭：阳离子外表活性剂，膜损害和蛋白质变性 甲醛：强还原剂，与氨基结合，蛋白质变性。 运用高锰酸钾的催化作用，促进甲醛敏捷蒸腾放出很多穿透力大，灭菌力弧的甲醛气体，进行空气消毒 发酵工程的产品：1.以微生物细胞为产品的发酵工业 2.以微生物代谢产品为产品的发酵工业 3.以微生物酶为产品的发酵工业 4.生物转化或润饰化合物的发酵工业 生物技能包含哪些首要内容？基因工程在生物技能中作用和方位？ 首要内容：基因、细胞、酶、蛋白质、分子进化工程 方位：是现代生物技能中的中心技能 作用： 基因工程的首要原理是运用人工办法将生物遗传物质——DNA别离出来，在体外进行切开、拼接和重组，然后经过运载东西将重组的基因导入某种宿主细胞或个别，然后改动宿主的遗传特性；有时还使导入新的遗传信息在宿主细胞中或个别中很多表达，以获得很多所需的基因表达产品（各种生理活性物质，如蛋白质、酶、多肽、抗生素等等）。 这种运用DNA重组技能来发明新物种或给予生物以特别的技能称基因工程，由此可见，基因工程为生物技能中的其他内容如细胞工程、酶工程等供给了根底，为其它内容供给新的，具有特别功用的细胞。 简述生物技能在食物工业中的作用 传统生物技能： 传统生物技能从很早上便为人们所开发和运用，并造福人类，如运用传统生物技能，人们使面包发酵，制作酒精饮料，果汁发酵、制醋和酿酒等。丰厚了食物的风味和品种 现代生物技能： 现代生物技能以基因工程为中心，带动了现代发酵工程、现代酶工程、现代细胞工程、蛋白质工程以及分子进化工程的开展，它的出现，为改造传统的食物出产、进行食物深度加工，开发新产品，进步食物质量和削减养分丢掉增添了新的生机 如其间的基因工程和细胞工程可改善食物质料农产品的质量和进步产值； 经过基因工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程和分子进化工程食物加工工艺高效化，进步食物附加值，进步农产品运用率，以及进步食物保健功用； 运用生物技能削减食物丢掉，确保食物的安全性和质量。 何为约束性内切酶？II型约束性内切酶的根本特征有哪些？ 约束性内切核酸酶，简称约束酶，是指一类能够辨认和切开双链DNA分子内核苷酸序列的内切核酸酶 根本特征： 辨认序列和切开位点：大多数II型约束性内切核酸酶可辨认长度为4-7bp的双链DNA特定序列，该辨认序列（辨认位点）常呈旋转对称性 切开办法：依据双链DNA被切开所称的结尾，可分为平齐结尾，黏性结尾和单链黏性结尾 同裂酶和同尾酶：由同尾酶切开DNA所得到的黏性结尾能够互相衔接起来，可是由此衔接构成的重组DNA分子往往不能被本来同尾酶中的任何一种从头切开，即本来同尾酶的辨认序列都已不再存在。 约束性片段长度与切开频率：不同约束酶切开后所发生的DNA后所构成的约束性片段长度纷歧 DNA聚合酶在分子生物学基因工程中有哪些用处？ DNA聚合酶催化DNA体外组成反响。不同DNA聚合酶具有不同用处： 大肠杆菌DNA聚合酶I： a以切刻平板法符号DNA；b对DNA分子的3’杰出尾进行结尾符号 大肠杆菌DNA聚合酶I大片段： a补平约束酶切开双链DNA所发生的3’凹端；b假如以符号的dNTP补平双链DNA的3’凹端，那么可对DNA分子进行结尾符号；c对DNA分子的3’杰出尾进行结尾符号；d在cDNA克隆中，组成cDNA第二链；e运用Sanger双脱氧结尾停止法进行DNA测序 T4噬菌体DNA聚合酶： a补平约束酶双链DNA发生的3’凹端；b假如以符号的dNTP补平双链DNA的3’凹端，那么可对DNA分子进行结尾符号；c对DNA分子的3’杰出尾进行结尾符号，而且该酶为运用此法进行此类结尾符号的首选酶；d将双链DNA的杰出端转化成平齐端 TaqDNA聚合酶： a对DNA进行测序b经过聚合酶链式反响对DNA分子的特定序列进行体外扩增 逆转录酶： a将mRNA转录成双链cDNA；b符号带5’杰出端的DNA片段（补平反响）；c当大肠杆菌DNA聚合酶I的KIenow片段或测序酶等运用成果不抱负时，它可用于双脱氧链停止法测定DNA序列 结尾脱氧核苷酸搬运酶： a给载体DNA或cDNA加上互补的同聚尾；b以32P符号的一种dNTP、一种ddNTP或一种rNTP来符号DNA片段的3’端 抱负的质粒基因工程载体的应具有哪些条件？ 分子结构中具有多个单一约束酶切位点，具有易被检测的挑选符号基因，且切点坐落挑选符号基因上； 能刺进、运载必定巨细的外源基因； 在带着外源基因前后在宿主细胞内均能自主仿制 在与外源基因构建重组质粒后具有转化功用； 分子量小，易于操作，一般为松懈型仿制操控 简单操控，安全可靠 Ti一元载体和双元载体体统比较有哪些优缺点？ 微型Ti质粒具有大肠杆菌质粒的仿制起点，能在大肠杆菌宿主中仿制，使其质粒复制数增加10-100倍 微型Ti质粒分子量小（10kb），能够直接对其进行体外遗传操作，而且将其导入根癌农杆菌也比较简单 一元载系统统的重组频率很低，而双元载系统统两个质粒的接合频率较高，一般后者比前者至少高4倍 一元载系统统构建成功后工程菌的安稳性较好，而双元载系统统相应安稳性较差，易丢掉 双元载系统统不需求经过共整合进程。因为，双元载系统统中的两个质粒不用含有同源序列，而且构建操作进程比较简单。 双元载系统统在外源基因转入植物细胞前，无须进行同源重组。因而刺进双元载系统统外源基因的或许变异比刺进一元载系统统外源基因的或许变异小 双元载系统统比一元载系统统对植物的转化功率高 符号基因应具有哪些条件？举例说明植物载体中常用的挑选符号基因和挑选符号基因 符号基因一般需求具有以下几个条件： 编码一种不存在于正常植物细胞中的酶 基因较小，能够构成嵌合基因 能在转化体中得到充沛表达 检测简单，并能定量剖析 植物载体中常用的挑选符号基因： Npt-II（新霉素磷酸搬运酶）基因：现在在植物基因工程中运用最广泛的挑选符号基因 原理：其表达产品经过酶促磷酸化作用使氨基葡萄糖苷类抗生素失活，然后免除其毒性，它对茄科植物的转化挑选特别有用，可是，其对豆科植物和单子叶植物的转化挑选作用欠好 HPT（潮霉素磷酸搬运酶）基因： 原理：其表达产品经过酶促磷酸化作用使潮霉素失活，然后免除其毒性 植物载体中常用的挑选符号基因： Gus（β—葡萄醛酸糖苷酶）基因：来自于大肠杆菌染色体 其在植物细胞中所发生的葡糖醛酸糖苷酶在检测上具有以下特色： A 在必定条件下水解特定底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡糖醛酸酯生成蓝色物质，出现蓝色沉积。因而，既可用分光光度计测定，又可经过安排化学办法直接调查植物安排中的蓝色沉积斑驳 B 在必定条件下，水解特定底物4-甲基伞形酮酰-β-葡糖醛酸苷生成4-甲基伞形酮，发生荧光，因而，可用荧光光谱法测定，该法十分活络。 C 检测简洁、敏捷且能定量 D Gus检测比Ntp-II检测廉价，且不需求运用放射性同位素 Cat（氯霉素乙酰搬运酶）基因：该基因来自于细菌转座子Tn9 其在植物细胞中所发生的氯霉素乙酰搬运酶在检测上具有以下特色： A 可用硅胶G薄层层析法等测定所生成的乙酰化产品以确认该酶的活性，但操作繁琐 B 一般Cat基因表达产品不行安稳 C 测定花费大 酶促符号探针的办法有哪些？用到了哪些东西酶？ 切刻平移法：DNA酶I DNA聚合酶I 随机引物法：DNA聚合酶I 结尾符号法：DNA聚合酶I，T4DNA聚合酶，T4多核苷酸激酶，结尾脱氧核苷酸搬运酶 Southern blotting的试验流程及留意要害 试验流程： 用恰当的约束性内切核酸酶对待测DNA进行酶切→ 经琼脂糖凝胶电泳将所得DNA片段按分子量巨细别离→ 将含有DNA片段的琼脂糖凝胶进行碱变性处理→ 将其间的单链DNA片段搬运到硝酸纤维素滤膜或其它固相支持物上（各DNA片段的相对方位坚持不变）→ 放射自显影或免疫酶法显色显现杂交成果 留意要害： 所取待测DNA样品的量因样品品种及研讨意图而异，关于克隆片段的约束性内切酶图谱剖析，取0.1-0.5μg；关于判定基因组DNA中的单复制基因序列，取10-20μg；关于选用寡核苷酸探针或当探针的比放射性活性较低时，取30-50μg 选用恰当的约束性内切核酸酶酶切待测DNA样品的意图在于获得适宜长度的DNA片段，一般来说，较抱负的片段长度为0.5-10kb 电泳完毕后，需求在紫外线下仔细调查查看DNA样品有无降解，酶切是否彻底，电泳别离作用是否抱负，DNA电泳带型是否明晰，有无拖尾现象。 一般选用0.45μm孔径的硝酸纤维素滤膜，但当DNA片段小于300bp时，可选用0.22μm孔径的硝酸纤维素滤膜或选用尼龙膜 PCR反响系统有哪些成分？PCR的根本流程 反响系统： KCl 50mmol/L Tris-Cl 10mmol/L（在室温时pH8.4） MgCl2 1.5mmol/L 明胶或牛血清蛋白 100μg/L 2个引物 各0.25μmol/L 4种底物（dATP、dCTP、dGTP、dTTP） 各200μmol/L 模板DNA 0.1μg TaqDNA聚合酶 2.5IU PCR的根本流程： 变性，经过加热至必定温度使双链DNA两链之间的氢键开裂，DNA双链离解构成两条DNA单链 复性，当反响系统温度忽然下降时，因为模板DNA分子的结构比引物DNA分子杂乱得多，而且反响系统中引物的量大大多于模板，因而引物和与其互补的模板配对构成部分杂交双链，而变形后离解构成的两条模板DNA单链之间互补配对的时机则较少 延伸：在4种脱氧核糖核苷三磷酸底物、Mg2+等存在的条件下，TaqDNA聚合酶以模板-引物杂交体分别为模板和引物催化DNA链沿5’-3’方向组成延伸，每个循环的扩增产品作为下循环的模板 PCR引物规划的一般准则 长度可为15-30nt，常为20-27nt G+C含量一般可谓40%-60%，常为45%-55% 组成碱基尽或许随机散布，不能存在聚嘌呤或许聚嘧啶。特别3’端不能以3个接连G或许3个接连完毕。不然，会使引物在模板G+C富集区过错引发。 引物本身不能存在互补序列，接连互补碱基不能超越3个。不然，引物本身会折叠构成发奖状等二级结构，这些二级结构的空间位阻作用更影响引物与末班的复性结合。 两个引物之间不能有互补性，特别3’端不能存在互补性。不然，会构成引物二聚体。两个引物之间不能超越4个接连碱基的同源性或许互补性。 引物3’端准则上须与模板DNA配对。当引物3’端末位碱基为A时，即便在错配的情况下，也能较好引发链的延伸。而当引物3’端末位碱基为T时，假如为错配之碱基，其引发链延伸的功率就大大下降。当引物3’端末位碱基为G或C时，假如错配之碱基，其引发链延伸的功率就介于上述两者之间。因而，引物3’端的末位碱基最好选T、C或G，不选A。 因为引物5’端只约束PCR产品的长度，而不影响扩增的特异性，因而引物5’端可被润饰。润饰包含：附加酶切位点、引进蛋白质结合序列、骤变位点、启动子、生物素等。总归，引物5’端碱基没有严厉约束，只要与模板DNA结合的引物部分的长度满足，其5’端碱基能够不与模板DNA匹配而呈游离状。 假如需求扩增编码区域，引物3’端就不要停止于密码子的第三位，因为密码子的第三位易出现简并现象，然后影响扩增的特异性与功率。 引物的序列与模板的非扩增区序列之间的同源性不要超越70%或许不要有接连8个碱基互补同源。 反向PCR，简并PCR，逆转录PCR，巢式PCR 反向PCR：将含已知序列区段的DNA分子，用在已知序列区段内没有切点的适宜的约束性内切核酸酶前言，发生巨细适于PCR扩增的酶切片段。将这些酶切片段的两头衔接起来构成环状分子，用一对与已知序列区段两边互补的引物进行PCR。对已知序列区段而言，在引物与模板复性后，两引物的3’端相背，两引物的延伸沿环状分子的不知道序列区段进行。 简并PCR：所谓简并引物是指碱基序列不同，但有相同碱基数的一组针对某一基因相同区段的寡核苷酸混合物。 值得指出的是，因为次黄嘌呤可与任何碱基配对，因而在碱基高度简并方位能够运用次黄嘌呤代替。 简并引物PCR是指运用简并引物进行PCR的办法，该法首要用于仅知蛋白质部分序列而求知其编码基因序列的研讨、寻觅已知基因宗族中新成员的研讨等。 逆转录PCR：以总RNA或mRNA为模板进行逆转录，然后再进行PCR扩增。该法首要用于基因表达等研讨。 巢式PCR：首先以榜首对引物对模板进行扩增，即扩增靶基因中较大区域片段DNA，然后再以较大区域内的序列规划组成第二对引物。再对模板进行PCR扩增，即扩增靶基因中较小区域片段DNA。 该法两次接连扩增模板靶基因，可进一步进步PCR检测的活络度和特异性。该法特别适于微量模板的扩增 假如要别离方针基因，应该至少知道哪些特征？ 在彻底方位基因核苷酸序列的情况下，基因的别离战略大多比较杂乱。一般别离基因的战略多根据基因一下几个根本特性中的至少一个：①具有特定的核苷酸序列；②存在于基因组中某一特定方位；③编码mRNA；④大多具有必定的功用。 方针基因制备的办法有哪些？ 基因化学组成法：①全基因组成；②基因的半组成 就化学实质而言，基因是一段具有特定生物功用的核苷酸序列。假如知道了基因的分子结构，就能够进行基因的化学组成。 基因组文库法：①机械切开法；②约束性内切酶部分消化法 是一种直接从基因组中别离意图基因的办法。所谓基因组文库是指聚集某一基因组一切DNA序列的重组DNA集体 cDNA文库法：是从真核生物细胞分中别离意图基因的常用办法 cDNA文库：是指聚集以某种生物老练mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA集体 构建cDNA文库的一般操作程序如下： 总RNA的提取→mRNA的别离→cDNA双链的组成→cDNA与载体衔接→噬菌体的包装及转染或质粒的转化 PCR法：可用于已知核苷酸片段的特意扩增；而一些改善的PCR法能够用于一些不知道核苷酸序列核酸片段的特意扩增。 重组体导入大肠杆菌，植物动物各有什么办法？ 植物：①农杆菌质粒介导法；②基因枪法 动物：①显微注射法；②磷酸钙共沉积法；③电穿孔法；④病毒感染法 重组体挑选和判定办法（遗传检测法） 运用表型特征进行挑选 运用载体供给的表型特征进行挑选（抗药性符号基因刺进失活挑选法；β-半乳糖苷酶显色反响挑选法） 运用外源DNA供给的表型特征进行挑选 运用噬菌斑的构成进行挑选 运用遗传互补作用进行挑选 物理挑选判定法（电泳检测法；R-环检测法） 运用约束性内切核酸酶酶切进行判定 运用核酸杂交进行判定 运用PCR技能进行判定 运用免疫学办法进行挑选判定 放射性抗体检测法；免疫沉积检测法；酶联免疫吸附检测法 运用Western杂交进行判定 运用寡核苷酸序列测定进行判定 转译挑选判定法（阻断转译杂交法；开释转译杂交法） 几丁质酶具有抗真菌作用，规划试验获得几丁质抗真菌植物 基因序列已知 基因序列不知道 ↓ 规划引物（加适宜约束性内切酶 ← 获得基因序列 位点，确保阅览框不被损坏） ↓ 扩增基因、酶和Ti载体衔接 （适宜的启动子、停止子、挑选符号等） ↓ 挑选阳性克隆（抗药性、PCR、酶切、 测序）i ↓ 转化农杆菌、转入植物细胞 ↓ 挑选转化细胞，验证、获得完好植株 ↓ 点评 蛋白质工程 蛋白质工程的组成部分 蛋白质工程首要包含以下两方面： 分子遗传学的相关理论与技能： 完好的cDNA克隆技能、DNA序列的快速测定技能、DNA序列估测蛋白质序列的多维程序系统、原核生物及真核生物基因表达进程的调控、基因的定位诱变及随机诱变理论与技能 蛋白质结构功用相关的理论与技能： 蛋白质一级结构——氨基酸序列的剖析、X光单晶衍射结构剖析技能、两维和三维核磁共振结构剖析技能、蛋白质数据库的树立、蛋白质功用的酶学和免疫研讨技能。 意图基因的定点骤变的办法有哪些 寡核苷酸引物大街的定点骤变 PCR介导的定点骤变 盒式骤变 易错PCR的原理，简述运用易错PCR进行酶分子进化的根本试验流程 易错PCR：是在选用DNA聚合酶进行意图基因扩增时，经过调整反响条件，如进步Mg2+浓度、参加锰离子、改动系统中四种dNTPs浓度或运用低保真度DNA聚合酶等，未改动扩增进程中的骤变频率，然后以必定的频率向意图基因中随机引进骤变，获得蛋白质分子的随机骤变体 第五章 细胞工程 何为细胞交融技能？诱导细胞交融的办法有哪些？ 细胞交融技能：是运用天然或人工的办法使两个或几个不同细胞交融为一个细胞，用于制作新的物种或品系（植物、微生物上用得多，动物上用得少）及发生单克隆抗体等的技能 诱导细胞交融的办法： 病毒诱导细胞交融、化学因子诱导的细胞交融、电交融办法、其他 影响微生物原生质体构成的要素有哪些？ 菌龄：微生物菌体的不同成长时期，体现的生理情况不同，不同成长时期的微生物细胞的细胞壁对脱壁促进剂的活络程度或许会存在很大的不同。一般来说，对数期的菌体易被溶解酶脱壁，原生质体的生成功率最高 培育基成分；构巢曲霉成善于葡萄糖+盐的培育基菌丝比酵母膏培育基培育的菌丝有利于原生质体的构成，下降磷或增加螯合剂也有利于原生质体的构成 培育办法也影响原生质体构成 酶的用量和处理时刻也影响原生质体的构成 获得的原生质体要保存与核实的浸透环境 微生物原生质体怎么制备？ 亲本菌株的符号（怎么将亲本菌株与杂种细胞有用地别离是原生质体交融技能中十分要害的一步） 亲本的符号是否适于交融子的有用检出和交融子中优秀性状的坚持有很大联络。 养分缺点型符号 抗药性符号 荧光符号 失活原生质体供体法 不同微生物细胞壁的消化 一般选用溶菌酶处理就可到达细胞壁消化的意图。首要的细菌细胞壁溶解酶可分为两大类：作用与糖苷键的糖苷酶类和作用于酰胺部分和肽部分的酶。前者也称自溶素，在微生物的细胞自溶中起重要作用；后一类酶包含了切开肽聚糖中肽段部分肽键的肽酶。 微生物细胞交融的根本进程 微生物原生质体的制备 原生质体的再生（原生质体只要再生才能对其子孙进行遗传判定， 而且再生率的凹凸，将直接影响原生质体交融育种的重组作用 原生质体的交融和杂合子的挑选 细胞系、细胞株、原代培育、细胞传代 细胞系：原代培育物经初次传代成功后即成为细胞系。假如传代有限，可称为有限细胞系；如可接连传代，则称为联络细胞系。 细胞株：经过挑选法或克隆从原代培育物或细胞系中获得的具有特别性质或标志的培育物称为细胞株。 原代培育：从供体获得安排细胞后，在体外进行的初次培育（PPT）。以直接取自生物体细胞、安排或器官开端的培育称为原代培育。 细胞传代：当原代培育的细胞增值到必定程度时（一般标准是瓶底被细胞掩盖），这时需进行别离培育，细胞由原代培育瓶别离稀释后转到新的培育液的进程，称为传代。（PPT）不管稀释与否，将细胞从一个培育容器搬运或移植到另一个培育容器即称为传代或传代培育。 植物细胞培育、外植体、愈伤安排、细胞全能性 植物细胞培育：即植物细胞的体外培育，是指在无菌条件i啊，将植物细胞从机体内别离出来，在养分培育基上使其生计和成长的进程。运用细胞培育技能能够直接调查到日子细胞的形状和成长活动，而且将植物微生物化，在必定容积的反响器中得到很多的植物细胞。植物细胞培育首要依据是细胞的全能性，即植物体每一个分解的细胞在必定培育条件下具有构成一个完好植株的潜在才能。再生的植物具有与母体植株根本相同的全套遗传信息。 外植体：植物安排培育中，作为离体培育资料的器官或安排的片段统称为外植体 愈伤安排：愈伤安排是由母体外植体安排的增生细胞发生的一团不定型的疏松摆放的薄壁细胞。一般愈伤安排培育中没有显着的安排或器官的分解。 细胞全能性：这是指植物体的每个细胞在离体条件下都具有诱导成长分解构成完好植株的潜在才能，这是因为每个细胞都有一套完好的基因组。细胞全能性是植物细胞核安排培育的首要依据。 植物细胞培育的养分要求和特色 植物细胞成长所需养分成分与整个植物对养分的要求相同，通产更包含：无机盐、碳源、维生素、成长调理剂、氮源、核酸及其水解物和其他成分。运用最广的是MS和LS培育基，特别适于植株再生。 无机盐：钾、铵、钙、镁、磷、 碳源和动力：一般以蔗糖和葡萄糖为碳源 维生素：植物细胞培育需求硫胺素，假如参加烟酸、吡哆醇、泛酸、生物素和叶酸的作用更好。原生质体培育大多数有必要维生素 氮源：一般用硝酸盐。硝酸盐+铵盐促进成长； 成长调理剂：成长素和割裂素 诱导子：生物诱导子（多糖类、肽类、不饱满脂肪酸类和糖蛋白类）、非生物诱导子（紫外线、高温、低温、pH、乙烯、重金属盐） 第七章 生物技能与食安和品控 何为生物传感器，有哪些根本组成单位？ 传感器：是一种能把一种信号转换成另一种信号以完成信号检测的元器件。 生物传感器：以传感器为根底，由生物学、电化学、光学、热力学及核算机等学科彼此浸透和交融的产品，是一个典型的多学科穿插范畴。（由生物活络资料作辨认元件与恰当理化换能器） 根本组成单位： 生物活络元件：（又称生物辨认元件，它是酶、抗原体和微生物细胞等具有分子辨认才能的生物分子经固定化后构成的一种膜结构，对被测定的物质有挑选性的分子辨认才能） 换能器：又称转换器，它能将辨认元件上进行的生化反响中耗费或生成的化学物质，或发生的光合热等转换为电信号，而且在必定条件下，发生的电信号强度和反响中物质的改动量或（和）光、热等的强度出现必定的比例联络，从实质将它便是一种化学传感器。 信号处理扩展设备：它能将换能器发生的电信号进行处理、扩展和输出。 传感器中生化反响中量的改动有哪些 热焓、光效应、色彩、阻抗、生化反响、直接发生电信号 生物扩展的机理有哪些 酶催化扩展、底物循环扩展（运用两个酶）、酶级联扩展、脂质体技能、 生物传感器的特色 省时省力、成本低、不需增加试剂、界敏度高、体积小、易于完成主动化、易于推行遍及（书上） 可重复运用、专一性强、剖析速度快、准确度高、操作系统比较简单，简单时刻主动剖析、成本低（PPT） 生物活络资料的固定化办法有哪些 夹心法、吸附法、包埋法、交联法、共价结合法、微胶囊法 生物传感器在食物安全和质量操控中有哪些运用 农药和抗生素残留的剖析：农残（乙酰胆碱酶）、抗生素残留 食物增加剂剖析：亚硝酸盐、甜味素、烟碱酸 污染微生物的检测：糜烂菌（经过测定M代谢发生的CO2核算其浓度）、病原菌（沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）（光纤、免疫、DNA） 生物毒素的检测：细菌毒素、真菌毒素、其他生物毒素 食物新鲜度：鱼鲜度、肉鲜度、牛乳鲜度 简述ELISA操作的进程：书362 抗原的包被→封阻→抗原抗体竞赛反响→酶标二抗与抗原抗体复合物的反响→底物显色反响和吸光值的测定→ELISA竞赛按捺曲线 发酵工程的方位： 发酵的流程 空气—空气净化处理—种子罐和主发酵 保藏菌种—斜面活化—扩展培育—种子罐—主发酵 碳源、氮源、无机盐等养分物质—种子罐和主发酵（灭菌）处理 以上三者—产品别离提纯—制品 第七章那里，传感器中生化反响中量的改动那里，不包含直接发生电信号 还有生物活络资料的给你化办法除了那6个还有成膜技能，在第342 便是 （一）生物资料固定化技能 ①吸附法 ②交联法 ③共价结合法 ④夹心法 ⑤包埋法 ⑥微胶囊法 然后（二）成膜技能 （1）半导体生物传感器成膜技能 ①紫外线照射法 ②光平板印刷法 ③喷射法 （2）LB膜技能

　　第11章三角形单元练习题 2021-2022学年八年级数学人教版上册（word版 含答案）.doc